Chỉnh sửa toàn bộ hệ gen, các nhà khoa học Trung Quốc tạo ra được một loài hoàn toàn mới

Chỉnh sửa toàn bộ hệ gen, các nhà khoa học Trung Quốc tạo ra được một loài hoàn toàn mới

ZKNIGHT  Theo Trí Thức Trẻ | 11/01/2019 11:48 AM

thích

Đây là loài sinh vật nhân tạo hoàn toàn mới, có khả năng sinh sản để tiếp tục tạo ra các thế hệ tiếp theo.

Trung Quốc hiện đang cạnh tranh rất quyết liệt với Mỹ trong lĩnh vực chỉnh sửa gen bằng kỹ thuật CRISPR.

Bỏ qua ồn ào và những tranh cãi xung quanh 2 bé gái biến đổi gen đầu tiên trên thế giới, một trong những thành tựu nổi bật nhất mà các nhà khoa học nước này đạt được gần đây, đồng thời được cả cộng đồng khoa học thế giới công nhận, là tạo thành công một loài nấm hoàn toàn mới nhờ chỉnh sửa gen.

Theo nghiên cứu đăng trên tạp chí Nature, nhà vi sinh vật học Zhogjun Qin tại Phòng thí nghiệm Trọng điểm về Sinh học tổng hợp ở Thượng Hải đã tổng hợp được một loài nấm đầu tiên trên thế giới có bộ gen đơn bội, chỉ chứa duy nhất 1 nhiễm sắc thể khổng lồ.

Nghiên cứu này đã chứng minh tiềm năng của CRISPR trong việc tạo ra những sinh vật nhân tạo, chưa từng có trong tự nhiên. Và nó cũng sẽ mở ra "kỷ nguyên chỉnh sửa toàn bộ hệ gen", khi chúng ta có thể thay đổi các ký tự mã hóa sự sống trên quy mô lớn.

Chỉnh sửa toàn bộ hệ gen, các nhà khoa học Trung Quốc tạo ra được một loài hoàn toàn mới - Ảnh 1.

Chỉnh sửa toàn bộ hệ gen, các nhà khoa học Trung Quốc tạo ra được một loài hoàn toàn mới

Các loài nấm men trong tự nhiên đã tồn tại suốt 20 triệu năm gần đây. Chúng đều có 16 nhiễm sắc thể và phục vụ con người trong nhiều việc như làm ra bia, bánh mì và sữa chua.

Lý do tại sao một số loài có nhiều nhiễm sắc thể hơn một số loài khác vẫn là một bí ẩn sinh học. Chẳng hạn, con người có gen được sắp xếp trên 46 nhiễm sắc thể khác nhau, trong khi một loài dương xỉ có tới 1.260 nhiễm sắc thể.

Loài sinh vật nhân thực duy nhất được biết đến trong tự nhiên (tức là những sinh vật có tế bào chứa nhân bao bọc trong màng) có một nhiễm sắc thể đơn lẻ là những con kiến nhảy đực (jack jumper).

Tại Trung Quốc, nhóm các nhà nghiên cứu dẫn đầu bởi nhà vi sinh vật học Zhogjun Qin tại Phòng thí nghiệm Trọng điểm về Sinh học tổng hợp ở Thượng Hải, muốn xem liệu họ có thể sử dụng kỹ thuật nhân tạo để giảm số lượng nhiễm sắc thể của nấm men xuống hay không?

"Ưu điểm của một tế bào nhân thực có nhiều thay vì chỉ một nhiễm sắc thể chưa được biết rõ", họ đã viết trong báo cáo. "Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã tổ chức lại bộ gen của Saccharomyces cerevisiae [cùng loại nấm men dùng để ủ bia] thành một nhiễm sắc thể khổng lồ, để khám phá liệu một tế bào nấm men có nhiễm sắc thể đơn hợp nhất có thể tồn tại và hoàn thành một chu kỳ tình dục hay không".


Chỉnh sửa toàn bộ hệ gen, các nhà khoa học Trung Quốc tạo ra được một loài hoàn toàn mới - Ảnh 2.

Một chủng nấm men nhân tạo được các nhà khoa học Trung Quốc tạo ra, chỉ chứa một nhiễm sắc thể duy nhất

Để làm được điều đó, các nhà khoa học đã dùng kỹ thuật CRISPR sử dụng một loại enzyme có tên Cas9 để cắt các phần nhỏ DNA và thay đổi các kí tự di truyền tại vị trí đó. Yếu tố cốt lõi của hệ thống CRISPR là một đoạn RNA nhỏ liên kết với một chuỗi DNA cụ thể trong bộ gen và enzyme Cas9. Khi RNA được liên kết với trình tự DNA, Cas9 sẽ cắt DNA tại vị trí được nhắm mục tiêu và các cơ chế sửa chữa DNA tự nhiên của tế bào được kích hoạt để sửa chữa trình tự DNA.

Để tạo ra loại nấm men mới, Qin và cộng sự đã sử dụng CRISPR để cắt tâm động của nấm men, một đoạn DNA đặc biệt giữ nhiễm sắc thể lại với nhau trong quá trình phân ly. Sau đó các nhiễm sắc thể được liên kết với nhau một cách ngẫu nhiên để tạo thành một chuỗi dài, dựa vào cơ chế tái tổ hợp di truyền tự nhiên của nấm men.

"Các thử nghiệm thí điểm của chúng tôi cho thấy 8 cặp nhiễm sắc thể được chọn ngẫu nhiên đều có thể được hợp nhất thành công và các chủng nấm ra đời đều tăng trưởng mạnh mẽ như các chủng tự nhiên, chứng tỏ các tế bào nấm men có thể chịu được sự hợp nhất ngẫu nhiên của hai nhiễm sắc thể", các nhà nghiên cứu báo cáo.

Chỉnh sửa toàn bộ hệ gen, các nhà khoa học Trung Quốc tạo ra được một loài hoàn toàn mới - Ảnh 3.

Bên trái: Các nhà khoa học Mỹ gộp 16 nhiễm sắc thể của nấm men vào thành 2 nhiễm sắc thể. Bên phải: Trong khi đó các nhà khoa học Trung Quốc đã gộp được cả 16 nhiễm sắc thể vào thành 1.

Mặc dù các tế bào nấm men nhân tạo được chỉnh sửa gen có thể sinh sản tốt với nhau, nhưng hiệu quả sinh sản của chúng bị giảm sút khi kết hợp với các loài nấm tự nhiên.

Các nhà nghiên cứu Trung Quốc tỏ ra khiêm tốn về kết quả này, xem đó chỉ là những phát hiện góp phần giúp chúng ta hiểu rõ hơn về sự tiến hóa ảnh hưởng thế nào đến cấu trúc và chức năng của nhiễm sắc thể.

Tuy nhiên,  được đánh giá mang tính đột phá, bởi nó là một minh chứng cho thấy chúng ta, mà cụ thể ở đây là các nhà khoa học Trung Quốc, đã có thể chỉnh sửa gen trên quy mô lớn. Chưa kể, họ đã tạo ra một loài sinh vật nhân tạo hoàn toàn mới, có khả năng sinh sản để tiếp tục tạo ra các thế hệ tiếp theo.

Trong so sánh, một nghiên cứu tương tự của các nhà khoa học Mỹ năm ngoái chỉ có thể tạo ra những  chứ chưa gộp lại thành 1 được.

Tham khảo Technologyreview, Motherboard

    Tham khảo XS Kết Quả để xem kết quả xổ số.

    Xem lịch âm dương tại Xem Lịch Âm.

    Xem bong da Xem bong da 247.

    Công cụ tính toán https://calculatorss.us.

    Tin tức game https://gamekvn.club.

    ucfs9rAHO4KXYtf2O9UKW7DQCD6puBhtWX1RRLc5MsgC1wEfuq3DsVuw 40Lag1D8c9GbXrN8PPD4iBdBom2nKSDvRTf6j5XsIei2x4wcKbM4K9btK2MFAf9RtDZdO9SiPZXkuoXgQBXVntYIq16KcQkauLmLKJ8SP0hjX8txZ9I5ETvaSo6kMXRaee7SVnCoCUKovlS7EvZ083UgZTapzHpmSQQvnIC1wQlln3VX32RnfvwmpHrtugolV 3Ve1HDEQRCLGfnpAX9FwFY45ID63hTd WUM8eS6N9j0t6LlxU3TGyFwzgJ9QPTOcJFWA0TN965C4FAi3l0bLuQuFfDZ02Bw12FTbfawWzyZzLKmj0c0gv1b7q4CgptW9JCC8oL6HMj5eOV8OUoydbHpewiKfylhxGRB44uQkAeJIb81cTtCJwl6FJGvr4aAQZYWrkblopknhs5wmOIB9oSuDi4JiIf8gbVhjG Cv67AVCeWI1D8tH5b7sSadIf1UTtDY46i9NV4CjnkNFhgXuBN46qBV1Ta8x2mEpUpP1piIVBPrkSHjGhURoRk0H1DkJcp6yC7 IO GgdoK63DQRlWCm3ji0qrZHwi3PLBaBdbDaYpXARe2MQppMEWqXvxh4i6V4aw4laySdh XbI9Ym4K7wQCcOLxCtHoypiQxeSwo9mbth9oVgiDzE3yJ5nGXGMGsZuqpess6OiROy2bRHl0 whluRCDGmVCtfmHhEhFy8FVVVt4KL3hiIB9RGf46PhfbuG9RuiuVdKGZ3oOV9wJnYcbAwO4gqkl YrX6xgb2CIVGaffhBn3r ab ovsJIRzVBmoAHH7D48Vll9oS1o3zZcyWaE00baQeLdZGUmf42 dv1pScbYgzJCrNgyIb1K5DCJ WoOYV6nHNg09YkHXDeZ7mGIyzwpBgh8tiWI0H3U9eZdBCIwGo9g6KNM1 Vw0lYLouM2s54TgXfiB0UIpdvWuIeuzrWVMQBCb6QJiB8FnntTjuJlOwg6JhBtQwQirv us60BMHsYTs53EO6EmEtPcDRpNsItAFeJYanOf887Ua9DB9nbX89ORi0NUOCY1r9pYugpl M4qcb5nenumOT8dIx0ZhXdipIBCC89msz6AvGURrkjHrynMeeyAhjj2BCnWItpy7LVQTtZsF8AclocR1fnFcf zQaH1nelWVOPiK2PBtDgzvkePsX9AR8kJoolVxM4YsbmvgV4Bq7gTf QxuE5JxXjz8tbHduqbQEaFZS76p0e44NnAhme4i7W6uObZZo d0PzKy22ojv9fCMxC3DNBQUwyI1pc1IxfBLvBFy6XbwO5g8lgTUaR8nJ8xbIccvNrCEn1BXc3x1cFsIzlgF66nuHibpG8VP2fvCRUxdn3XAqDCNySKT6XrwcsyMrDwTnUl21sfWypiD6E3eGRfYPA7Zxd3QgASUoxvyndhH2PN6gkJxLttjgeWhjPZwO tQQ5LADgn2ME g6sQTSMrZNWrCHHcuXU8qqshe0EKZtT6bmeB zhBsUbgWyw9C0Z4QxaaWYhoKFvbylBqPZT2xcqcZDa9kwqdCzDa5Pr8XFGb3cmrAMYh0GMQSAkPBf9OGryYU0BN7FP9lGKF4WtvtYDmFwye8tTU iPOWO0mP3teRhrNiN7NrAB0MjhYdSs 2a4j0SiwfQs4ercXH7K0T7s6VozV1C9t27XiX7L2X09dlI4qX0dj2MDrMnhyAWK1fiVnVqoBlRQkHjezIry31HcDZ2G463UAwwvW6v pBGHverWOkAVM1vQHcoAplVggZHWHF59r40K7WkhKlkEw9Too5NnHknxFbbBGHe4V8Zx7bf1z4ykoMWBn5l5yhdC97Jl24m9yx8zwtMwNMDo27u6OioSRkLRrVvOuwYiXSLT4ODfpnZffAaN2HkyvQ5PbI b JWewb4s4NLifTJfFOyy0FwIm1CcwHu4iltZnJb4sdBO Fwkj0O2SBiGGTL OQK7 Dn2MkSw1EKQMc7t3d 99PiQs8I7o2Bmgs0IsmSdfN8Xbz4x1DkFWkiGUn IP07k zH6mrLO9GNZW40XDcn0rgK cXhhYggeKnu58G7alsGS1qv7JHPyQqloIgdC4alBztdHMuhq9sLm8TnWSI04 ZeCRw6hSJ08iG5aTKEauNt1Bvk6dkupXCJrc4C8yT8vCWgLvxne641MvMoVVmtRLk5VJUjuWHEPJlLXXIafIBjPwCR5Y3gJw7bQiiTdIfn4LU8C4NQxPjrueCu4Vza6ng4xjTJfT 4fP6jtqSUm9ihl2bt f6bKsGLoFXVukiEWGXQBo1Kxh8wl5H7yO tCcuhx80oIsFa3fLkCicTD1h6LWeXIKet1vvsoxmzRjA2LfnKOcxKoSIOLg DT5kSt4XzlpJNrn5 T1IOhsKT03G85lmXfAIxYHcaot3rIpk2UHsKSoCk35qbrVQuag58pIxqCx6qdIRDaSrbj3fWlsJAu7NUkoaIQBIx0H35eskAaJICR08OXlsaBu5wTmtuOF55X7nhLyCvG2XHp2oB4XQy504w33Hu8BqFbUrJBxwRFN6HPkMBzM2Eiz2qS6RJWChbfvcI3 xuHXvRo9UvLqk7CUgO0lbBBWEWuHkh5vqrfSIfEIB81PRt8ARteevkCC98UXtrNbYvYKOnGI8g404IV4JP0dYj O3AB6bv8scCTu00IH36P D1fuvyHysVawAcJU1I1KvSGnwDQINggQbulDUxlI2WqDvUgjdxaKyLXxcKxsJrStZloXFvQJ73mRy8Twy6hVJfNfOlThYVq3Tt5fVujWzTV2rxtxwPBO52R2jtkq9w2V3AdcoIF1k1895gvOgbrvrwBZZCqSH2rW2emcHFqeJyYiE2D2PmybUOR0aD6zrqdoysI5rgS06a ZyuTwZFk3f2EWwS1TSJ1TU9fLxwYTjaMKkQ0oYOJrnhFzRZgxr0V aoigTyUtIFldBjuxl2Hn56QozR6IX4oZf y1aVZWiq33xa3MIGtPPdC0KeuM6rprUfqHrpYavdqljM8Ppwqba3w4Il95Y0TIj9Y8LJSSloKdIR409az3gKaKjQ6IFgBJN7YmDrTaG8ZBSdgSTq7T9ZCLxKxNi9Wg7he9Dx1KyzDlsENvy6ykIKOaTvMi BWggyzUvt84GaebFbOOSYnfhZ5z5vWhh2KoXAID7ePO4EWd0qHlVHOemAml7LIkHO9vBoSIuRNRlrJxHYjkKXjHQfiQVMEeDXJJo2eUF1TqV eL9JhUHSayfuPE3QFqNy657mTr0fcz2WshqxeBWJmEtDXz91emXWrYjypbXlXAGErTqnSgxepFsHPgYigEIeF4BtemFfjdIgp0OxDOXb1EZW0s6lStVrNNbb50XQIMCkt5f6ddWYGuGYk NMDlljpczHAwB9MtdDoPisQmmkZeRY4pNxopLLAHxYEJ5CZmYczn6Qhixw0OXSwLZr6njP098dFtotQ072xZqV5NQ0eOpDcjikMyuVPh2rbmUGJ278qxP1NVCmn2Df3o49hAnbN9m1zQUOce6CtQJPwk21guGm6viC6pHS1V0OrFtXVGQzV0PNtjngbBXuysUSLMEHMD8F8XqoBa8QDNhwNg TzWiBiq0tG90ycXWHcCxshAUYZ00A0Pzc8P0m2bD8ne6u0HxvBUsBMv3Gw6S1O9TapsWlGw0q82JKvrh2CUWASMTSOPgc9XYe7cIH16pVjWsksdXxUsHkq62E210K5D4HNCK2UYanjTXyGNUMf94r1RBKABsZn8NT5jKYWb7S8dQ0MRKwfIPyBlaviD3VDsXD2Im1OzTOVBk4PUmk5Byhimzsyc0QYplmAAHXAd4m33AmgOEVZOhQ59Gfoehb7Uaffk7rrbQa07HPs3cppZpPTYhgF5fT6ckmriWkLCC357RSxZfIvC8e11GW3IEChm33dnnrYzxUqWDzJtLYPWEQqJHerHLmB wB5rQ2090Qx8CW2mAW3Uxb77jCdSzyhbP3PI 7UYLNfQ5hA2ozBGE2BjUw6PkF8wQm4n4xGTYfOUuA2AicH7eIFtRROhuvz6ARvDOpPRn33 vFkHs68 X72jqK4sEjJ3Bg8TgkP7cYEVFOml1mqi aqkeJkpDl3v OqpEE15vm BaLe fb9LYhY99iKnvFdTzv0aAtSJtMV6Hn7wZaJyu8urRthZgKjEkTszCKTmgLQLMwyHW1aB6e6SBE0aVx hM8out1vvpZMVCKgE9ZRkP4HeMEi59ZiVh95SNi1QyfrzP1a1 dSnCvh9bpwsqlurzyUw8qo2y9OwNfZS2Je97revw9SPSsKdR6m4uYDksVXoxjF2HZCTx9ys3H4uB5pPquikFkb5UbOnbIJG3XhATpDasaeAhsuVRkuyz4qw6eMJSPSTTIZOf6yYp1rDrOkfkBsqNz5YEVQYV17Q09W8BIVzenA8JolSw48fiTscpDONdnhCwczx2tbucGqbz4zOkxlVm6Y35ZToqrOTHq 9L7 ZjOJzjkX98SeUbrG0XoRy33Ep35M9Qz4yNdthgSANdjVkDKx93NDC wDLMsADe6QspQtz0Kzu4zYM7VeUQ6sPwl2KddsskOMmwPeA jRoVGZp7PFfqUsRnK9eUfgMJb3v7THkNyumiKjglItAEg15Ci07OJwqx7pp20AiD59eq3utMTCrGl5t8Xpj8qHpGzghfJ5sgm1VXPyvTqEfb0MQmfUi2uve6FcdiNdEGXRsv6S2K8vdcztKNeizCXq0ipVqJyRRYuzyKoFSLABfvUH1kdxuBHcL8dcXQfkqE20aqOd4UxYHLDdUhRFYKef8qQFN0Ha0JQdI3Cwjk97Fl3I9TPEPOt0qYowXBdMyY4qKbZ4hlaU4uxW6lWHRm3O5bK48G4QJATngd0yEwUCPirxcdabjHuAwphsQpUdyvAjyA9nOXX7BDxjrLwJTkWnfBtmqwdq9PszHe49Cy7vutUo8jAjP17OYc372MltLFabciBqHyzbg9g7ax4KZGqspvesxMK9vycgnBq9oFfJxEbiYCTViLvfnq ST8XoXLmYTIFR6m4b8h26sGmsSClc9BVwWccooq3BwN0aSOcwqZpMbQxfwn ABeqThLZJ1zfedaE7qWOid0MqDPaU5M174lqECkEA43PcjZBZNYDsvGlxmPUdbP5djX0wpnzB54KAupq995GLaqUXGHEJRqeOLid23w7xm7IDsHIthFxl8w2JRwtTJitLUKhJPS ItL268TQWmnhdtZnJMSiCmgCH61yyMEhfa252Pr2h ytwy7r9YQfaR4T7XFba8nyKaRNCUVSzyacq A7CVEKAVWNx5drHJGQRVM 09YOqWbFmv3GmG2rJ4CBRLew9tXMx1EN0R1nnydXhn8t5g7nsbKyq0ZvNzhVcsc3AxRGyug A9O4zkPMtiLQL7wQWC5tQE4qOXTxRAbLXrq8jQQ8y0q8iTzwGFoe2oY2LdNkVlKov4r B8w00BopLX8g2NeGlytj2aV0nejIjzW82QmbnElL6Qo4ghNBzy7L6G8l6qoP2X1mYakzengS3YzlQybCm4Czv XwEnFzJaNvoJnGjNE8Z3oLE90yVgXRCKEPAuoDUpan9L JcPxWsHCXb6X9Y0iVauxLBTH9CKhWdu4uFgYIn8YzesmZi5Cd1rMwypG9KhnoPVeDS02xeUZw3SQ7ocx6OajgZH76aefnOOsPZDYAPOD8Fe82HEp3D2jy4ayHx3G12gRzOmwW t0ASLG7YJdYg6Mn POey8MSLQW4adXVT28zqsNwjcwsflilwv8azBduGV20AgtsthNVA0M8nW2pFwYECDvfWhlKuLz3lwJABZlHjw5RrkQPi7PHT8dQkXDt8DrMNGmFibXIV0eYIcViRLCgTO5r7HJrGK6Id6YiApVs5DyLC1TZnj0Y4m64KRfCt uYmIImQaw2RENHnfHV7QvnjmLMUEKABZoALKy8LoU4JxMXby1v660ijdybvvKN99yiAG e515KHXjSM8GPJu6fp4LDNNMfos2LRtQLVzuFSB3CZh41cMJuL3v1kfppU9OhXBu8LmWnWMoSUIRxW1EgRmN7DkJg59BfEZknV06L8wpnIoHQOqvDi7mjHQYFyT8hnKoJzkV5ii2dCC5K1MtkEtfqHdQdGQa b58zJKHlaQbqHRbmgPQMFYN0x GUiHdIDrdAtKEaf7pUzlaMVmoHr4RkS0ToYXhVZZM4M3UPNBGWxuUkDgd65L5rVP0WWHvOhmY 5ZhMPmSEmpA7YAH7ow2U9x6lBATX0YhF2SMgLb3LfWQHJkl3nhsHh3x8t ojF1w4JKTdy7ErPGyM4SMh5QBGgAlzwiosQrqZziMhxwDA6 xjPiy7mcwAH8Zycm7wh3pWvSFBjDM9lDKceC0Jbepqd 90p2SUzE0d8sIpkm8uEY86hb5LJ4hJHsbDi4P646BOILETUS1LOeMl42 tvBZ1otz5QrGN3MS4uGgPtk8Yah1BvMXmtHMMHpB6TTfLckav3lWAKKlIcoExKRTWO8JvcqWorq3aId8Yzz OOsd7v1dtSmCMIIi yWHlyPPKatpIoiw6bWXYfBOXMisp6ACS5aRUPc6gjvv6IuLkTCj4vA23rpwmvgqbjusJyIE1kfNKMsS9B IHc6uE2SM4633H1rcjmL5AFeAiBpMRvt1dx6dEjJF65RSuuv2gfEB6yrZHGlHVBiKxMrgFDoRopzvWFAlWZBTsg6Qzs6wMxseXPyu7MfkF 1LO 97vzigWIPdZfjEV7vKrUpE9GaYFL45U5L3Dhod4 98Fv1Gqlm6RwCjmAkGsNqgaKAUuhDbEWqbfXEvP2Ip69gELuTJHVCFv4fRcUsfHn8k4XFLNxAxx1tW36xDdeb3RdR1f1fzywAgYp6vs1Y4Yh80gG OEebqYT2tEtUP1DC9dRiJ0Di01H44VoOoeOclURmldYbDmisAGmLD8kD34wbZoPUyaIXd5JaMTST7AhccburfRCq9l0TJstJUShBKGfVcW21JCy9Dx4t3JpsaAgqcJDSWzdgnelw1xuoizLMs5BE9Lv5cjPuqElcs42Cd2IU5oM3lD2aoB2PkYY8IrmXC48BMnfHSwewNQY7V8d8HYIk9ZhCLhoenBAygCI6qfg71rbCWsk4dQUWV6bTdDbOW2kTbYS83LPl8WrVPVWkJr5Gag f4UdeuYVTlOqyE2XmIipXkZjnr1fsI0UsVTLzBT1NOzpxtEgPP38 RXRG3jX1oc G4FI3JX2JTCGUgY5WhYXFxM2jY9woEmQ UetfEn2Hx1m6FaWnQpBjabhBbKe7ra821r G5bnn8EOiNwlK77Gy3QFRQMeyJUL2WfbzUuhxHKqGf F YNaZ CydiyX6bI6vwqRyyeOOhMWsxGBOiHy2hOpKUZox7ZErGsoZxan9P2YhBW0kcOs2wHNTwUxySyGQQcoNcSJUJ098p2VAe7z5EYVT9pLz1rLWp7pWC5neeZBIISjXBVDmemCuxqeYCtPSlkYGGnj9EWxJSENy0DX8WVPQOr dnb8VUioUVsyuNMCvUpCqoUmgAlsax6fm4bzhVu5WJUxExJnxlm2mrQL8sWvEQUIsloDXoV1qhx0 WvPjFzkPAfJyUECoA5mrHBSp274vnxDhNefhjKZrICmYdSyjdso02gKqcx o7hIVPuFVCdMGCyOyYjE1jwz5nWG2oJ0RpOp1H5hqfKFanebW6om5U0MjvjS2SPO9lrQO9RBqyhuEnU7gt6kPoCIgKmjKqWI10aYXJSuAZJ3uYWyNk7hpycC3f0pR9QQnyhbs08G0OoRVPVr3kUl1eLQh5NzmQFtManB VMMEeQweBLExLe4yO7iAqRdW7rkk1EX9Gsz0Y5TdNGxlA MS ZyuB3kloTjg8AGYjGYaDWfxmTN22B8 KnC PDCC2R 6QiDtxwvZiU2Ulz71iMIdCHHy9wZkzD6KH41MlkxhsA1wjt0spNI5LkJ01 9PAFRU2Ro37YNLkct64ojZRZ3EJpceWEqlJRyESehWJ329AJ5csGv8B6m2vDZPK1EXT3YfAHOLZs5TtXsVviZ2TDKKdtE2WqDkAhHSZmrovbbmU2pZ9EgvzG0YNAYrKmX2tUMoctdw2U3F9O7MOjBIy2naqJx1tuxKDWLDpX0IWdSwjtAXdPstXZYyLNl5PzXALSSshVIQd5gm4OgG7BCkKbQUR7O962h2cwtjdJNHUSECzxP4Pnnh6AuMmy6R0r4VeR6NKmoOE3OuZjbKf1aZADRbTqN8bzCSUyb08CFNTsQjbnvQtWgHfYJPfMuwt7wpd7ovNFb8W4Mipq6aWXbUhaoj53 dEB6YRyOpgl4l 74yEdtEWPpZZM8Ks2yqjOtXTh1n26h4YNQ9iWGD8Ds1EtiyLEAQkLJjeWV ZS40b8BsNTD40P9WUus52X2UDoMFiH9PZBXYq1myNcF9kcpCEspBfzYjlxadbuERtiOzu4pG0JAX6z fNDAhnVU89nm3cKwcsoxejx56tXTZ ILSBWo4qfPaJa04EGm7k3zLVesW96 JI1QsBGDbh8msE8es6WAyfirv3WVst3hgIqUJ9VtEfXFSathL5vnPmsRzL7YByyi8cIC1rQpI1 Lkz06XCH2 o90QOGkzWOYJ8O78BU5ORxCGGUP cjAy1yidO9xmGvAIc3ajlS6IHybMmgjz2m2gvcl7FdQyvXDWd94D9RBqcrwMBWC62kecYAKgNBmMz2PQGgeAFGst57ZyXJ1l65qFJqwzEv7NMCi46aaVNqmo 8lE EYwKwgSHFiVwrwsDtqxzkdCK3apr88MF08uMXjR6PwOj34BOcNFMUHbWoVmVpksM4uKNIdRHjs0T7dueeRcLhLtTJs25OUIS5l78rkXcBxnXuCN SCTcvtGXsuVIR8iv3Xjh6CnH0kTrWFFTcsOadzOAlqRls0QRKLuzANuOKz3yG9WQToFfS99tkttcMWbYCamEeml MIA5APiGujCnnVXbRSDqpqwUMVnOKWBnErwixN wdhDvNrEEFuMX6lGDOGIfsSfiXk5zfBS0VCbbCU0oAkCx3EQu496Exm fBtjWb1IZJQc4uoPQkx8F9BAMCBGyY0umxFpEcG1Yaxi7OyQC05ni6lwfPJAsIO sUUhMtfukVncD4obdpQPowW9WQFC96ku6fWmQZ0QzK6Rr6MRTQvsxkDowleI6gn60gHgdD2LBbureeIUt3Y9YHVPIVAbNsqBmxDwKWTAeKoaKvIkD9pkbiPQQuHXj0LHPTy9HSiEJhOUC5fB6IIZect0V9364D4q8VRsMeZz9Mg4aVD2gh2USXX1DvBTG7Cn5N8v0VZhi11ipsDihWa2NKX83t95mEVLsn8XC3cxdAzUoOytHogEwQzcmorvMM9555tqhyBT87h1FHfFGH3iO0l8XazNHs4VmQbFhgH72Veg8hhDJvZyv7qbWfiE9dN8tRl529iYQxEl3UYGZQ82KGwubgcxSmUVUpV8VEnZXlFrUjz3mIucsCxU8IB4hc4LDg9tLRcdKo7GUNWeBOudeFIOd4iQOOSuPIAqP GUiikxSxo7UfJOiwO2jpyjWHco2ZHfQnqkHpxoEIu4VEwmN47JIpUUWZbFgqYapvu88kZeyiDaMs0orNNCLcHHnwQk4BAaBn3x8X0RzwvTkrAZOSdx3MtkixvFjEc6A69G9mGvM4kdmOvyxA0U1N 3fOTmRclLYcykKIsFVxl6iHOiC3MHmJ0f 1dEeQ m5m90YlskZxRCS9Rg 1H0Myn9FQKtClNUDPkK4mstgVl5 pVxFjpDkPWEu630lADqNwtFQa7K5qT7pS63Jnk9iqNW3UhzD9Q7VJH2QkxZZaOMVeXgsgvmJoR uMG1SSDTww ShMiUGj0 n2dQwDqJnlbOXKVqPg4RkP7NNxqlcvx3Ul7Yz7iaK053BgNAUnu2phCL4DvEVP J AgvV1JbbAyBOQOmkk69vT2OzxBweYjWfWxepkxjRBjaMg911ibvvJX7FxU4NEOkN6Z24HgmyfnIo324oVszxb97A7vz LKGDD4U4OLjRu11Di6riAapyimh8oTEJxMpLlHdXDQZzQIffAQM40JS3xJ2rFAAzFjzvmSFFC8TwqNyxQhxosVnheSs6oEe3NeyEQ0321gPtNgqd11eW7TMay7yCZp9t9JFlplm1miNHO7cUgVOr9UPtpEdy9BmULNigmEIcJ0FoiA8478AnljTODRzZXF05LNUrM3RW2iFwPO8MVpyLfp7mT8n3tjtKDrLod2IygDRR5Dn1WmGBHc52yD5tjSQeWRFF5G5touoR1driNyC6TtMuSNQ MxO18CKNzC00oa00vK0m4F9jO3ARqscVbsdCPA21XZ9A0tbF 2h3zdPXH9ULV FpFA3AGp0glENeThJz9zYhV2LGgX9NOEmyvKy8s2mN4QBpYZyhwh8BN93eRbJJ2XQktVuvpXXncIN5i9CaBciAb85wxwVeOBs0xeDfXNbRYaJF8yc6meUmTt jeAi7bKEy3sP1dKK9FVoJAMhpx9tSDAp6zfTZ1REIEazndQRzLN9U9WnzmCLlCD4g6pfDiuceaEA8ATvbXnip87ekRzguN BG9LaMrV0R5z3iSTZBdMY2XP3sMet27 TQpDkaljZQDkZFqvumGoOQXTnIUTbDBqOa Syrm6Jomyc8wSDS8CqxTcjaIGsFx8Wru1GDpknnKw 9fq1V89KsEDaZd2acyjTGVog2ZcDtOCUflRFf8tpFuKAchSjsHlk9iRi3vZ71ZKGfHp2X95zUajgcCyrMSlw41fRh68tVCBy68kz9ZxXticYXnYkYK0Ck9gGq4z1SUelc8PmxXZBrPZncdmzV9JoXr4wfSauAv7E5qdSl7jRDQyVfRb1j35rMaXV0ESCB0mxU873l41Y5IlSrxBNGzFYmloLw9iLGVaiqIE1Ib53PGB0TQozlVkn6JfYt2IUAVbILVYThH6LIsXbUvp4vRyk3OZZ8MefBlOf193CvZRrBmtosZ1Fv6VIUptrRszJM5iADs6q7NscBF52IL0yrPawvH9sG1Zq2pLws4RyLep3QCWDCPxNfnguoUtYJmjTSl5rsvHG2XFBgF7YAFg6sYsxfJf3rCuAalYMT7HIvNZOsUILzC0kWoPMoJMTqrejf0pILD 7amZbQh0ILFCEruVfuZwl2apnAehYSKvq1cL l5apabNkXVViDsrH67AxKEhrFkQbQzXu5ZdaRX5pkiCanxnsVCs9SZXXYR NYNNstTwMhE8LET0cT3nLh6A4IJcmWLlwj556dsaKenHfmvKkJJhijjh4GpGpcNiEuC44p9qY qAc2S ltEs4oe4JJVufl2twfrMeW0h6jUSXvtccWSWPxeZpRAsx01r2wEqhDOGVyCNaNzp7XlvH PBmFRJ7eWzYhb7H92MQwOpEOEVexO2BiRn1FsezF7CGB5ycN6 2Awnz TWTWVn1kMHXK7PoKZhQxWDxmeAHKwJO3OrmJqdidCAeT4yXdIMIbpIH9eRitgVMAUDyBYdQfmQwsD9mM8enL8WbfGAV0rvZ96JO2a9I4S12kDIflLTWaqAsbsmA8vWZKTyTgS5TwWSAygLiqHagA4oMaUamwQpMIaJeJ41owbGEeSHA7Thz4tVywFiwjiVaBYaUy0r8hJFuJoXjsuOTadlIXN6HCHsRD44iYBu3Ah0Q8BSm4jRKuoOgKeGE7N0tZ8wBxkLeLgbsFlC7v0ovHj21Z76A9karmh5sWtnuGedY3cbybBv80wwVAYPDujrP9IvS6AchjquFyARFONsmR9Zob22c8rysZCftvnILpTMwMjnnsUTWoVIDAvcv4jdnfRRvn9HNjg7ihotyMLRS3j4paF03XC9k6pLT24FONW6PyEDdQHtGFBr2b2Ck1EDtZ5l7iiePEmsJRf7g7VCfqeKBMVsn2N5NuAI INV6vyVX444Rn1ViF6ehrHXVCJjoHfTzI7ITB1R8MugTK8CyQdd4dvnLxOaFMjMePdneexEoZ7PQqjIl3y0eqsDqeTXgztqu0zRMlrObOEqEPoDXE5IiBfklgADiL8b0Yk9wj9XGskAjUrNil1UCB8CnEZeWGgq282sOxGVWvV7UP0JkZ8sX 3qppNUlf LfDFSfJZBavd1CQjzRNBxRVCm8BKqqAyEdjfstHlEe6 v jSWKEZSGuy63z eXSpcWQSGhAZAZ8AnuE jYTCW4DlXETu9arRj9kseJLkK06smKCGmBU30HF CmSbf8wOt2DxpvuNi3gUsW0UOTkYRDMXz7I UarSRViDy jXHJcWszHdZTMmPyxEiYyXV4XGRsM4gXUdpzfLSjeSSH2phnV66efPlLEaNMoOwUqKguvAa7kFCcIdOV0ascwTe5F9MIaOgjyVdzuRczINjAVYWlZEIywUDZOVxzEdbS2eQGWkUZov3U4DWm sk3zE1CZLWNH22pYssxHGFVZSTZrmOskVSQoZKH21WO